1. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,并盡量避免起泡。
1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)2型蛋白抗體
芳香基硫酸酯酶H抗體
溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體
載脂蛋白1抗體
突觸融合結(jié)合蛋白6抗體
精氨酸酶1抗體
腺苷酸激酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體
三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7抗體
磷酸化鈉鉀ATP酶α1多肽抗體
Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATP酶α1抗體
肌動(dòng)蛋白樣蛋白6B抗體
脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白7抗體
磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體
β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體(X11α)
載脂蛋白E抗體
甲胎蛋白AFP抗體
陰離子交換蛋白2抗體
鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體
三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體
載脂蛋白J抗體
載脂蛋白H抗體
二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶4抗體
AKIRIN2蛋白抗體
ADP核糖基化樣因子8B抗體
三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體
AKIRIN1蛋白抗體
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